超敏型BCA法蛋白定量试剂盒

产品货号：

BTN80816

中文名称：

超敏型BCA法蛋白定量试剂盒

英文名称：

Hypersensitive BCA Protein Assay Kit

产品规格：

500T

发货周期：

1～3天

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本制品是在BCA法蛋白定量试剂盒基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒，尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。

蛋白质分子在碱性条件下将二价Cu离子还原为一价Cu离子(双缩脉反应)，一个一价Cu离子再与二个BCA分子鳌合产生一种在吸收波长为562nm的紫色水溶性产物，根据紫色水溶性产物的浓度反推出蛋白质的浓度。

保存：室温，其中BSA标准品需置于-20℃保存，有效期1年。

用户自备

样品缓冲液

用合适的方法制备待测蛋白样品，并把蛋白质溶解在合适的样品缓冲液中。本检测方法受待测样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保待测蛋白溶液中EDTA的终浓度不高于10mM、二硫苏糖醇不高于1mM、β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何EGTA。如果达不达上述要求，则需要稀释样品，使其浓度降低到上述浓度之下。
将本试剂盒提供的BSA标准品（2mg/mL）10μL和490μL自备的样品缓冲液（用于溶解待测样品的溶液）混合，得到500μL浓度为0.04μg/μL的BSA工作液，放冰上待用，用于制备标准曲线。上述量足够一次实验使用。此BSA工作液每次实验均需要新鲜配制。
配制超敏BCA工作液：先计算一次检测所需BSA工作液的体积。如果有N个样品，每个样品只做一次重复，再加上7个标准曲线样品，一般多准备10%的量，故一次检测所需BSA工作液的体积为：0.15mL×（N+7）×110%。配制时将超敏型BCA蛋白定量溶液A、超敏型BCA蛋白定量溶液B和超敏型BCA蛋白定量溶液C按50∶48∶2的比例混合得到到所需体积即可。如果需要10mL，则三种溶液体积分别为5mL、4.8mL、0.2mL，所得溶液即超敏BCA工作液。

取一块96孔板，按下表加入上步新鲜制备的BSA工作液、N个待测蛋白样品和自备样品缓冲液：

在每个孔中（总体积为150μL）加入等体积的超敏BCA工作液并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
60℃放置1小时。本试剂受温度和时间影响较大，故需要准确定时和定温，以保证精确定量。
冷至室温，迅速在562nm下比色测定所有样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。测定操作最好在10分钟内完成，否则化学反应还在继续进行，光吸收值每10分钟会升高2.5%左右。
处理数据：将编号为0号的样品（对照）的读数从其余所有样品（包括0号样品，其读数变成零）中扣除。
制作标准曲线：以0～7号样品的BSA含量（单位μg，见上表最右行）为横坐标，0～7号样品吸光值（扣除背景读数的）为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
再将N个待测样品的吸光值（减去0号样品的读数后）标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量（μg）就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度，单位为μg/μL。

第5步加BCA工作液后也可以在室温放置2小时，或60℃放置30分钟。超敏BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育60分钟。
待测样品浓度在20～2000μg/mL范围时有较好的线性关系。

超敏BCA法测定蛋白浓度时，不受下列化学物质的影响：

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